紫外可見(jiàn)分光光度計定量、定性分析需注意的問(wèn)題
更新時(shí)間：2018-06-25 點(diǎn)擊次數：4129
使用紫外可見(jiàn)分光光度計進(jìn)行定量和定性分析需注意以下一些問(wèn)題：
吸光度讀數范圍：吸光度測量誤差在透過(guò)率過(guò)大或過(guò)小時(shí)都會(huì )變大，為了滿(mǎn)足定量分析的誤差要求（<5%），在定量分析時(shí)要求吸光度應在一定的范圍內，這個(gè)范圍的具體值與儀器性能有關(guān)，主要是與紫外可見(jiàn)分光光度計檢測系統噪聲大小有關(guān)，但通常都在0.1~1.0范圍內，如果儀器的檔次更低，則范圍更窄。根據朗伯比爾定律，影響吸光度大小的因素主要是樣品摩爾吸光系數，濃度和比色皿光程。實(shí)驗中吸光度過(guò)大的樣品可通過(guò)稀釋樣品使吸光度到所需范圍內。如果樣品不能稀釋?zhuān)梢愿挠霉獬梯^小的比色皿減小吸光度。吸光度過(guò)小的樣品可使用光程較大的比色皿以增大吸光度。
吸收波長(cháng)的選擇：進(jìn)行單波長(cháng)測量時(shí)，需要考慮朗伯比爾定律對入射光單色性的要求和測定靈敏度的要求。沒(méi)有干擾時(shí)，一般選擇在吸收峰的大吸收波長(cháng)位置處，如果有干擾，選擇在沒(méi)有干擾且吸光度變化較平緩的位置。 進(jìn)行多波長(cháng)校正時(shí)，除盡量滿(mǎn)足單波長(cháng)測定的波長(cháng)要求外，還要求多個(gè)組分間的吸收光譜間線(xiàn)性無(wú)關(guān)。
狹縫的選擇：狹縫的大小會(huì )影響到儀器的信噪比和標準曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍。狹縫過(guò)大，通常會(huì )使線(xiàn)性范圍變小，特別是當不在大吸收波長(cháng)位置測定時(shí)更是如此。狹縫過(guò)小，信噪比變差，基線(xiàn)平直度和測量數據的重復性會(huì )變差。此外，還需要考慮樣品吸收峰寬度的影響。通常單波長(cháng)測定時(shí)，一般選擇在大吸收波長(cháng)位置，線(xiàn)性范圍容易滿(mǎn)足，可選擇較寬的狹縫（1~2nm）多波長(cháng)測定時(shí)，很難同時(shí)在所有波長(cháng)都滿(mǎn)足線(xiàn)性范圍要求，應選擇比較小的狹縫。
重復測定次數和波長(cháng)掃描速度：對吸光度不是很大的樣品，或者狹縫不是很小，這是檢測器檢測的光信號的強度是比較大的，重復性較好，可選擇較少的重復次數。相反，如果樣品吸光度很大，狹縫很小，選擇較大的重復次數可獲得更好的結果。
測定波長(cháng)間隔：在掃描光譜時(shí)需要選擇，可根據樣品吸收峰的寬度進(jìn)行選擇，峰寬較大時(shí)，可選擇較大的波長(cháng)間隔。反之亦反。通常每個(gè)正常的吸收峰應該用不少于30個(gè)數據點(diǎn)表示出來(lái)。
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